牛降鈣素(CT)ELISA試劑盒

ELISA的基礎(chǔ)是抗原或的固相化及抗原或的酶標記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或仍保持其學活性，酶標記的抗原或既保留其學活性，又保留酶的活性。在測定時，受檢標本（測定其中的或抗原）與固相載體表面的抗原或起反應。用洗滌的使固相載體上形成的抗原復合物與中的其他分開。再加入酶標記的抗原或，也通過反應而結(jié)合在固相載體上。此時固相上的酶量與標本中受檢的量呈一定的比例。加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標本中受檢的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進行定性或定量分析。由于酶的催化效率很高，間接地放大了反應的結(jié)果，使測定達到很高的度。 ELISA可用于測定抗原，也可用于測定。

組成結(jié)構(gòu)：

1、 ：操作中避免任何細胞。使用不含熱原和內(nèi)的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅細胞迅速小心地分離。

2、 ：EDTA、檸檬酸鹽、肝素可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、 細胞上清液：1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、 組織勻漿：將組織加入適量鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、 保存：如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

此IBL試劑盒能用于小鼠,EDTA,細胞上清中白介素-6的定量檢測

試劑盒成分

1 預包被板: 抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 96T

2 酶標記: (30倍濃縮)HRP標記抗小鼠白介素-6兔子IgG,親合純化 0.4mL x 1

3 品: 重組小鼠白介素-6 0.5mL x 2

4 EIA緩沖液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 30mL x 1

5 標記稀釋液: 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 12mL x 1

6 顯色劑: TMB底物液 15mL x 1

7 終止液: 1N 12mL x 1

8 濃縮洗滌液: (40倍濃縮) 含1% BSA, 0.05%吐溫20 BPS 50mL x 1 操作說明 1實驗所需器材(但試劑盒沒有提供) 酶標儀(450nm) 微移液管及其吸嘴 量筒及燒杯 去離子水 冰箱(4°C) 坐標紙(log/log) 吸水紙 試管(用于品稀釋) 溫育箱(37°C ± 1°C) 洗瓶 (用于洗板) 一次性試劑管(用于濃縮酶標記和顯色劑)

ELISA測定結(jié)果如何計算.ELISA測定結(jié)果計算如下：1.計算陰性對照A值的平均數(shù)(NCX )和陽性對照A值的平均數(shù)(PCX)。2.兩個平均數(shù)的差(P-N)大于一個特定的數(shù)值，例如0.400，試驗才有效。3.3個陰性對照A值均應≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此范圍，則棄去，而已另兩個陰性對照重新計算NCX；如有兩個陰性對照A值超出以上范圍，則該次實驗無效。4.陽性判定值按下式計算：陽性判定值=NCX+0.05。5.標本A值>陽性判定值的為陽性，小于陽性判定值的為陰性。需要注意的是，試劑盒的常數(shù)只適合于該特定條件下，而不是對各種試劑均可通用。

酶免ELISA試劑盒是一種常用的學實驗技術(shù)，常用于抗原或的定量檢測。這種試劑盒利用酶聯(lián)吸附法（ELISA）技術(shù)，將已知的抗原或吸附在固相載體表面，使酶標記的抗原反應在固相表面進行，用洗滌法將液相中的游離成分洗除。ELISA試劑盒具有高靈敏度、高特、快速、易操作等優(yōu)點，在醫(yī)學、生物學和化學等領(lǐng)域廣泛應用。

牛降鈣素(CT)ELISA試劑盒

試驗原理

試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)吸附實驗（ELISA）.已知濃度的品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將生物素標記的同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中的濃度呈比例關(guān)系。

自備材料

1． 蒸餾水。

2． 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。

3． 振蕩器及磁力攪拌器等。

安全性

1． 避免直接終止液和底物A、B。一旦到這些，請盡快用水沖洗。

2． 實驗中不要吃喝、抽煙或使用化妝品。

3． 不要用嘴吸取試劑盒里的任何成份。

4． 試劑應按標簽說明書儲存，使用前恢復到室溫。稀稀過后的品應丟棄，不可保存。

5． 實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。

6． 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7． 使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時，避免使用帶金屬部分的加樣器。

8． 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。

9． 洗滌酶標板時應充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。

10． 底物A應揮發(fā)，避免長時間打開蓋子。底物B對光，避免長時間于光下。避免用手，有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。

11． 加入試劑的順序應一致，以所有反應板孔溫育的時間一樣。

12． 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。

牛降鈣素(CT)ELISA試劑盒

做好對照

正式試驗時，應分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件，待檢樣品應作一式二份，以實驗結(jié)果的準確性。有時本底較高，說明有非特反應，可采用羊、兔或BSA等封閉。

實驗條件的選擇

在ELISA中，進行各項實驗條件的選擇是很重要的，其中包括:

（1）　固相載體的選擇：許多可作為固相載體，如聚氯、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體，在使用前均可進行篩選：用等量抗原包被，在同一實驗條件下進行反應，觀察其顯色反應是否均一性，據(jù)此判明其吸附性能是否良好。

（2） 包被（或抗原）的選擇：將（或抗原）吸附在固相載體表面時，要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃ 18～24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進行滴定：即用不同的蛋白質(zhì)濃度（0.1、1.0和10μg/ml等）進行包被后，在其它試驗條件相同時，觀察陽性標本的OD值。選擇OD而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1～10μg/ml。

（3）　酶標記工作濃度的選擇：用直接ELISA法進行初步效價的滴定（見酶標記部份）。然后再固定其它條件或采取“方陣法”（包被物、待檢樣品的參考品及酶標記分別為不同的稀釋度）在正式實驗里準確地滴定其工作濃度。

（4）　酶的底物及供氫體的選擇：對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應，而本身無色。有些供氫體（如OPD等）有潛在的致癌作用，應注意防護。有條件者應使用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后，應加入強酸或強堿以終止反應。通常底物作用時間，以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制，尤其是H2O2在臨用前加入。

ELISA試劑盒檢測中的注意事項

1、要移液槍的準確性，誤差不能超過2%?？捎盟碗娮犹炱竭M行確定。有人員進行矯正。

2、要配備20ul、50ul、100ul、1000ul和排槍各一支。吸取不同的后，要更換槍頭。即使是吸取品時。

3、要在實驗前1小時將試劑盒從冰箱中取出，使各種試劑都恢復到室溫，以使結(jié)果更。

4、實驗時，要使底物避光保存。

5、用槍吸取時速度不能太快，以免產(chǎn)生氣泡而使吸取量不準確。

6、吸取時，要用量程和需要量接近的槍去吸，誤差。

7、將加到酶標孔中時，避免槍頭和孔內(nèi)，可使槍頭上的液滴和孔壁，液滴會自然流下去。

8、全部加完后，可將酶標板在桌子上平行輕輕晃動30秒，混勻。也可以用酶標儀的晃動功能。

9、溫浴時，要用不干膠或膠帶紙封好酶標板，防止水分的蒸發(fā)。

10、洗板時，每次洗液加入后，應靜置1分鐘，使清洗更加。沒有洗板機時，倒去后，要將酶標板在報紙或毛紙上拍干。

11、洗液不夠時，可用蒸餾水自行配制PH7.4，0.02M的緩沖液，加入0.1%的吐溫20作為洗液。加入1/1000的疊氮鈉后可長期保存。

12、底物是光的，要在臨用前現(xiàn)配。

13、檢測前，要打開酶標儀，使之10分鐘以上。

14、底物有一定的毒性，終止液對皮膚有腐蝕性，應盡量避免。

15、待檢樣品要澄清，否則會影響結(jié)果。

16、溫浴時間應遵守試劑盒規(guī)定。

17、應盡量做雙孔實驗，這樣才能數(shù)據(jù)的準確性。

18、對結(jié)果有疑問的樣品要用其它進行確證。

主營產(chǎn)品: ELISA試劑盒,ELISA檢測試劑盒,標準品,生化試劑

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