線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm)試劑盒紫外分光光度法說(shuō)明書

紫外分光光度法 50管/48樣    

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

商品屬性：

產(chǎn)品名稱：線粒體異檸檬酸脫氫酶（ICDHm)試劑盒紫外分光光度法

貨號(hào)：LZ-S01144-A

規(guī)格 : 50管/48樣

測(cè)試方法:紫外分光光度法

產(chǎn)品分類：三羧酸循環(huán)系列

發(fā)貨地：上海

測(cè)定意義:

CDHm（EC 1.1.1.41）廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中，在三羧酸循中催化異檸檬酸生成α-酮戊二酸，同時(shí)將NAD+ 還原為NADH，是三羧酸循環(huán)的限速酶之一，其催化的反應(yīng)是細(xì)胞NADH主要來(lái)源之一。

測(cè)定原理:

ICDHm催化NAD+ 還原生成NADH，導(dǎo)致340nm處光吸收上升。

需自備的儀器和用品

紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制:

試劑一：50mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑二：10mL×1 瓶，-20℃保存；

試劑三：1mL×1 支，-20℃保存；

試劑四：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑五：粉劑×1 支，4℃保存；

試劑六：粉劑×1 支，-20℃保存；

試劑七：粉劑×1 支，-20℃保存; 臨用前加入 3mL 蒸餾水充分混勻待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

工作液的配制：臨用前把試劑五、試劑六轉(zhuǎn)移到試劑四中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

樣本的前處理：

組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：

1、 稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞，加入 1mL 試劑一和 10uL 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。

2、 將勻漿 600g，4℃離心 5min。

3、 棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g，4℃離心 10min。

4、 上清液即胞漿提取物，可用于測(cè)定從線粒體泄漏的 ICDHm（此步可選做）。

5、 在步驟④的沉淀中加入 200uL 試劑二和 2uL 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或200W，超聲 3 秒，間隔 10 秒，重復(fù) 30 次），用于線粒體 ICDHm 活性測(cè)定。

生化檢測(cè)試劑盒操作步驟：

一、?準(zhǔn)備工具和環(huán)境?：確保操作臺(tái)面干凈、整潔，這是進(jìn)行科學(xué)實(shí)驗(yàn)的步。

?二、?仔細(xì)閱讀說(shuō)明書?：這是使用試劑盒的基礎(chǔ)，說(shuō)明書包含了所有必要的信息和操作指南。

三、樣本采集?：按照說(shuō)明書的指導(dǎo)，正確采集樣本。不同類型的檢測(cè)可能需要不同類型的樣本，如血液、唾液或鼻涕等。杭州

?四、樣本混合?：將樣本與試劑小心混合，注意輕柔操作，避免產(chǎn)生泡沫，以確保檢測(cè)的準(zhǔn)確性。

?五、?等待反應(yīng)?：混合后，耐心等待試劑盒的反應(yīng)，這個(gè)時(shí)間可以用來(lái)進(jìn)行其他活動(dòng)，但不要著急，因?yàn)楹玫慕Y(jié)果值得等待。

六、結(jié)果判讀?：時(shí)間到后，仔細(xì)判讀結(jié)果。試劑盒通常會(huì)有明確的指示，告訴你如何根據(jù)顯示的線條或顏色來(lái)判斷結(jié)果。

注意事項(xiàng):

①加入試劑的順序應(yīng)一致,以所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。

②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。

③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。

④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。

⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。

⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。

⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。

⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。

⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。

公司正在出售的產(chǎn)品：

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TLR3 (Toll-like receptor 3 0.5mgTLR3 (Toll-like receptor 3) Toll樣受體3抗原

GFPT1重組人 GFPT1 / GFAT 蛋白 Protein

CSF1 Protein Human 重組人 M-CSF / CSF-1 蛋白 (His 標(biāo)簽)

SDF2 Protein Human 重組人 SDF2 蛋白 (His 標(biāo)簽)

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