考馬斯亮藍法蛋白含量試劑盒可見分光光度法說明書
可見分光光度法 50管/48樣
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
產品名稱：考馬斯亮藍法蛋白含量試劑盒可見分光光度法
貨號：LZ-S01370-A
規(guī)格 : 50管/48樣
測試方法:可見分光光度法
產品分類：蛋白含量測定系列
發(fā)貨地：上海
測定意義：
樣品可溶性蛋白質含量常常用于酶活性計算。此外，可溶性蛋白質含量也用于食品等質量分
析。
測定原理：
在酸性溶液中，考馬斯亮藍 G-250 與蛋白質結合形成藍色復合物；該復合物在 620nm 處有大吸收峰， 其顏色的深淺與蛋白質的濃度成正比。該方法靈敏度高，適合微量蛋白質分析。
自備儀器和用品：
離心機、分光光度計、石英比色皿、移液器和蒸餾水。
試劑的組成和配制：
試劑一：液體 30 mL×1 瓶，4℃保存。
樣品中可溶性蛋白質提?。?/span>
1. 液體樣品：澄清液體樣品可以直接測定。
2. 組織樣品：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：20 的比例（建議稱取約 0.05 g 組織，加入 1mL 提取液（自備，根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水））冰浴勻漿，8000g，4℃離心 10min，取上清，即待測液。（動物樣品常常需要稀釋）
3. 細菌、真菌：按照細胞數(shù)量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7秒，總時間 3min）；然后 8000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。
操作步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時不能產生氣泡
2.溫浴
1.加標本后和加結合物后,應立即放入按規(guī)定的反應溫度的水浴箱。
2.各ELISA板不應疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應加蓋,或將板平放在底部墊有濕紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應的時間和溫度通常不做嚴格要求。 如室溫20℃,ELISA板可避光放在實驗臺上,以便 不時觀察,待對照管顯色適當時,即可終止酶反應。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過程中不是反應步驟,但卻是決定實驗成敗的關鍵。
2.目的是洗去反應液中沒有與固相抗原或 抗體結合的物質以及在反應過程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質。
4.讀板
1.陰性對照顏色極淺,在定性測定中一般可采用目視比色。
2.如用酶標儀測定結果,準確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標儀的質 量和軟件的算法。
生化檢測試劑盒常見問題：
在使用生化檢測試劑盒時，可能會遇到一系列常見問題，這些問題主要涉及到試劑盒的使用、保存、有效期、樣本處理以及實驗操作等方面。以下是一些常見的問題及其解決方法：
一、?測定原理?：生化試劑盒通過化學反應或酶促反應測定樣本中物質的含量或酶活性。常用的儀器包括分光光度計和酶標儀，它們的測定原理基于朗伯-比耳定律。土壤、水質、動植物組織、血清、細胞細菌、食品等樣本均可進行測定?。
?二、選擇不同規(guī)格的試劑盒?：根據(jù)實驗的實際情況選擇合適的試劑盒。如果實驗室有酶標儀且具備檢測波長，可以選擇微量法試劑盒；如果有分光光度計及相應規(guī)格的比色皿，則可以選擇常量法或微量法試劑盒。建議購買前仔細閱讀說明書，確認自備的儀器和試劑是否符合要求?。
?三、保存方法?：收到試劑盒后，如果暫時不用，應按照外包裝上指示的溫度保存。拆開包裝后，應按照每個試劑的保存溫度進行保存，注意有些試劑忌反復凍融，有些粉劑溶解后性質不穩(wěn)定?。
四、?有效期?：一般生化試劑盒的有效期為6個月，也有特殊貨號的有效期為1年。具體以實際收到貨物的標簽信息為準?1。
?五、樣本處理?：新鮮樣本和冷凍樣本都可用于大多數(shù)指標的測定，但有些生理活性物質容易降解，建議使用新鮮樣本測定。對于冷凍樣本，建議在-70℃或液氮中保存。樣本在不同溫度下的保存時間有所不同，例如4℃可保存一周，-20℃保存一個月，-80℃保存3個月?。
?六、土壤酶活性測定?：對于土壤酶活性的測定，建議將鮮土風干并過篩后取樣，以測定的重復性。若使用鮮土測定，需樣本的顆粒大小一致且水分含量相似?。
七、?預測定?：在進行正式測定前，建議選擇2-3個預期結果差別較大的樣本做預實驗。通過預測定可以全面反映樣品特點、試劑質量、儀器設備穩(wěn)定性和操作規(guī)范性，確保正式測定結果真實可靠?。
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